在过氧化物酶（peroxidase，POD）催化下，双氧水（H₂O₂）将愈创木酚氧化成茶褐色产物，此产物在 λ 470 nm处有最大吸收峰，故可以通过测其吸光度的变化测定过氧化物酶的活性。

1 试剂

（1）0.05 mol/L 磷酸缓冲液（PBS，pH 7.8）

（2）0.2 mol/L 磷酸缓冲液（PBS，pH 6.0）

（3）2-甲氧基酚（愈创木酚）

（4）30%双氧水（H₂O₂）

2 实验方法

2.1 样品前处理

称取0.2 g样品置于预冷的研钵中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）预冷的磷酸缓冲液（pH 7.8），在冰浴上研磨成匀浆，转入10 ml离心管中，低温12000 r/min离心20min，上清夜即为酶粗提液。

2.2 测定方法

（1）反应混合液的配制：取100 ml磷酸缓冲液（pH 6.0）于烧杯中，加入38 μl愈创木酚（2-甲氧基酚）于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷后加入56 μl 30％的H₂O₂，混匀后保存于4℃备用。

（2）酶活性测定：取3 ml反应混合液，加入35 μl酶液（可视情况调整）后测定470 nm下的吸光度，10 s测定一次，测定120 s。以PBS（pH6.0）代替酶液作为对照调零。

2.3 计算公式

以每分钟内OD值变化（升高）0.01为一个酶活性单位（U）。按下式计算酶活性：

其中：

过氧化物酶活性以酶单位每克鲜重每分钟表示（U/g·min）；

ΔA₄₇₀为反应时间内吸光度的变化；

V_t为提取酶液总体积（ml）；

V_s为测定时酶液用量（ml）；

W为样品鲜重（g）；

t为反应时间（min）。