当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸发生反应，溶液变为红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 λ 520 nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。

1 试剂

（1）3% 磺基水杨酸溶液

（2）2.5% 酸性茚三酮溶液

（3）10 μg/ml脯氨酸标准溶液

（4）冰醋酸

（5）甲苯

2 实验方法

        2.1 标准曲线的绘制

取7支具塞试管，按下表加入各试剂，迅速混合均匀后，在沸水浴中煮沸30 min，立即取出置于冰水中冷却。冷却后准确加入4 ml甲苯，剧烈振荡30s以萃取红色物质，静置片刻后，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0号试管为空白对照，在 λ 520 nm下测定吸光度。以脯氨酸含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

2.2 样品前处理

称取0.2 g样品置于预冷的研钵中，分三次加入6 ml（2 ml、2 ml、2 ml）预冷的3%磺基水杨酸溶液，在冰浴上研磨成匀浆后，转入具塞试管中，在沸水浴中煮沸10 min（提取过程需经常摇动），取出置于冰水中冷却，过滤到干净的试管中，滤液即为脯氨酸提取液。

       2.3 测定方法

（1）吸取2 ml提取液放入具塞试管中，然后加入2 ml冰醋酸和2 ml 酸性茚三酮溶液，迅速混合均匀后，在沸水浴中煮沸30 min，立即取出置于冰水中冷却。

（2）冷却后准确加入4 ml甲苯，剧烈振荡30s以萃取红色物质，静置片刻后，取上层溶液至离心管中，4000 r/min离心5 min。

（3）用吸管轻轻吸取上层脯氨酸甲苯溶液至比色皿中。以0号试管为空白对照，在 λ 520 nm下测定吸光度，通过标准曲线方程查得脯氨酸含量。

        2.4 计算公式

其中：

脯氨酸含量以以每微克每克鲜重表示（μg/g·FW）；

C为查标准曲线值（μg）；

V_t为提取液总体积（ml）；

V_s为测定时提取液用量（ml）；

W为样品鲜重（g）。